Η ποσοτικοποίηση του ριβονουκλεϊκού οξέος (RNA) είναι ένα μέσο για τον προσδιορισμό της μέσης συγκέντρωσης του RNA σε ένα διάλυμα. Αυτός ο προσδιορισμός μπορεί να πραγματοποιηθεί χρησιμοποιώντας μια ποικιλία διαδικασιών, οι οποίες συνήθως εμπίπτουν σε μία από τις δύο κατηγορίες: φασματοφωτομετρία ή ποσοτικοποίηση φθορίζουσας βαφής. Η φασματοφωτομετρία βασίζεται στην ικανότητα του RNA να απορροφά ορισμένα μήκη κύματος υπεριώδους φωτός. Ορισμένες φθορίζουσες βαφές, όπως το βρωμιούχο αιθίδιο, μπορούν να συνδεθούν με νουκλεϊκά οξέα όπως το RNA και θα φθορίσουν όταν δεσμευτούν, επιτρέποντας τη μέτρηση της φωτεινότητας.
Όταν το RNA εκτίθεται στο υπεριώδες φως, θα απορροφήσει επιλεκτικά αυτό το φως στα μήκη κύματος των 260 νανόμετρων (nm) και 280 nm. Αυτή η μέθοδος εκτελείται σε ένα φασματοφωτόμετρο, το οποίο παράγει μήκη κύματος υπεριώδους φωτός, και μετρά το φως που διέρχεται από το RNA. Μεγαλύτερες συγκεντρώσεις RNA θα απορροφήσουν περισσότερο φως.
Ένας συνδυασμός αυτών των δύο μηκών κύματος χρησιμοποιείται συχνά στην ποσοτικοποίηση RNA, καθώς αυτή η μέθοδος επιτρέπει στους ερευνητές να μάθουν εάν ένα δείγμα είναι μολυσμένο από άλλα μακρομόρια, όπως πρωτεΐνες. Αυτοί οι ρύποι συχνά απορροφούν επιλεκτικά φως 280 nm, αλλά όχι φως στα 260 nm. Ως αποτέλεσμα, ο υπολογισμός της αναλογίας του απορροφούμενου φωτός και στα δύο μήκη κύματος μπορεί να καθορίσει τον βαθμό μόλυνσης.
Η ποσοτικοποίηση RNA χρησιμοποιώντας φθορίζουσες βαφές δίνει αποτελέσματα που είναι λιγότερο ευαίσθητα σε ορισμένους ρύπους και μπορεί να χρησιμοποιηθεί με χαμηλά επίπεδα RNA που θα καθιστούσαν αδύνατη τη φασματοφωτομετρία. Βαφές όπως το βρωμιούχο αιθίδιο θα συνδεθούν με το RNA και η προκύπτουσα φωτεινότητα μπορεί να μετρηθεί απευθείας χρησιμοποιώντας φωτόμετρα φθορισμού. Εάν δεν υπάρχει διαθέσιμο φωτόμετρο, μπορούν να παρασκευαστούν διαλύματα με γνωστές συγκεντρώσεις RNA και η φωτεινότητα του άγνωστου δείγματος μπορεί να συγκριθεί χονδρικά με αυτές. Η σχέση μεταξύ φωτεινότητας και συγκέντρωσης RNA είναι γραμμική, επομένως οι ερευνητές μπορούν να προσδιορίσουν γρήγορα μια μέτρηση συγκέντρωσης από τη φωτεινότητα.
Ο ποσοτικός προσδιορισμός RNA χρησιμοποιώντας οποιαδήποτε μέθοδο μπορεί να είναι πολύ ευαίσθητος σε διαφορετικούς ρύπους. Οι πρωτεΐνες, η φαινόλη και τα μεγάλα σωματίδια μπορούν όλα να κάνουν τα αποτελέσματα της φασματοφωτομετρίας ανακριβή. Αυτές οι προσμείξεις δεν επηρεάζουν την ποσοτικοποίηση του RNA της φθορίζουσας βαφής, αλλά αυτή η μέθοδος μπορεί να καταστεί ανακριβής λόγω της παρουσίας δεοξυριβονουκλεϊκού οξέος (DNA) σε ένα δείγμα.
Οι χρωστικές που δεσμεύουν νουκλεϊκά οξέα θα δεσμεύσουν τόσο το DNA όσο και το RNA και θα εμφανίσουν παρόμοιες φωτεινότητες, επομένως η διασφάλιση ενός καθαρού δείγματος RNA είναι σημαντική. Ο συνήθης τρόπος για να επιτευχθεί αυτό είναι με την προσθήκη ενός ενζύμου που καταστρέφει το DNA, όπως η DNAse, σε ένα μικτό δείγμα πριν από την προσθήκη μιας χρωστικής. Ανάλογα με τη συγκέντρωση του RNA σε ένα δείγμα και το ποιοι μολυντές υπάρχουν, τα εργαστήρια μπορούν να χρησιμοποιήσουν οποιαδήποτε από αυτές τις μεθόδους για να ποσοτικοποιήσουν το RNA.