Un test imunosorbent legat de enzime (ELISA) este un test efectuat într-un laborator de imunologie pentru a determina nivelurile de proteine dintr-o probă biologică. Detectarea ELISA se referă la etapa finală a testului în care se adaugă o soluție limpede sau un substrat pe o placă de plastic care conține anticorp marcat cu enzimă legat. Enzima scindează substratul și are loc o schimbare de culoare. Absorbanța luminii a soluției colorate finale este apoi măsurată pe un cititor de plăci ELISA sau spectrofotometru.
Există diferite tipuri de teste ELISA, cele două cele mai frecvente fiind ELISA indirectă și ELISA de captură sau sandwich. ELISA indirectă este utilizată pentru a detecta o proteină, cunoscută ca anticorp, în serul unui pacient. Un exemplu de test ELISA indirect este testul virusului imunodeficienței umane (HIV) utilizat pentru a detecta anticorpii împotriva HIV. Testul ELISA sandwich detectează o proteină, sau un antigen, prin captarea acesteia între doi anticorpi. Detectarea hormonului gonadotropină corionică umană (hCG), care este crescută în timpul sarcinii, se face cu un test ELISA sandwich.
Ambele teste au o etapă de detectare ELISA la sfârșitul testului. Această etapă implică adăugarea unui anticorp care are atașată o moleculă de enzimă. După adăugarea anticorpului marcat cu enzimă, se adaugă o soluție incoloră, care conține molecula de substrat specifică pentru acea enzimă. Enzima scindează molecula de substrat și soluția își schimbă culoarea în funcție de combinația utilizată. Determinarea cantității de anticorp sau antigen din proba pacientului se face prin măsurarea intensității schimbării culorii.
Există mai multe combinații de substrat de enzime disponibile pentru utilizare în etapa de detectare ELISA. Cea mai comună enzimă este peroxidaza de hrean (HRP), care poate scinda moleculele substratului diclorhidrat de orto-fenilendiamină (OPD) și tetrametilbenzidină (TMB), printre altele. Scindarea atât a OPD, cât și a TMB are ca rezultat o culoare galbenă, iar densitatea optică sau absorbanța luminii acestor substraturi este măsurată de un cititor de plăci ELISA. Absorbanța luminii a OPD este măsurată la o lungime de undă de 490 nanometri (nm), în timp ce TMB este măsurată la 450 nm.
O altă enzimă comună utilizată în etapa de detectare ELISA este fosfataza alcalină. Această enzimă este utilizată cu substratul p-nitrofenil fosfat (PNPP) și produce, de asemenea, o soluție galbenă. PNPP absoarbe lumina la o lungime de undă de 405 nm.
Selectarea combinațiilor de substrat enzimatic se bazează de obicei pe anticorpii marcați cu enzimă care sunt disponibili comercial, precum și pe ce echipament va fi utilizat pentru a măsura absorbanța luminii. Numeroasele combinații disponibile pentru detectarea ELISA fac testul ELISA extrem de versatil. Este un instrument important în laboratoarele de cercetare și testare a bolilor.