Τι είναι ένα συζυγές αντισώματος;

Ένα συζυγές αντισώματος είναι ένα μόριο σήμανσης που μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε ιστολογικούς ή ενζυμικούς προσδιορισμούς ανίχνευσης αντιγόνου για τον εντοπισμό δεσμευμένων αντισωμάτων. Λειτουργεί με την φυσική σύνδεση ή σύζευξη με το αντίσωμα που χρησιμοποιείται για την επισήμανση ενός αντιγόνου ενδιαφέροντος. Ένα αντίσωμα που επισημαίνεται σε ένα συζυγές αντισώματος είναι ένα εργαλείο που χρησιμοποιείται συχνά στην έρευνα για τον εντοπισμό είτε της ακριβούς θέσης είτε της ποσότητας των πρωτεϊνών ή των αντιγόνων που ενδιαφέρουν, έναντι των οποίων αναπτύχθηκαν το αντίσωμα ή τα αντισώματα.

Οι ιστολογικές και πρωτεομικές αναλύσεις βασίζονται συχνά σε αντισώματα ως αντιδραστήριο σε ερευνητικές τεχνικές με τις οποίες μπορούν να επισημανθούν συγκεκριμένες πρωτεΐνες. Με την έκθεση ενός αντιγόνου ή πρωτεΐνης που ενδιαφέρει σε ένα αντίσωμα που αναπτύχθηκε εναντίον του, μπορούν να επισημανθούν αντιγόνα ή πρωτεΐνες. Χρησιμοποιώντας ένα συζυγές αντισώματος – δηλαδή, ένα αντίσωμα που έχει συζευχθεί με ένα μόριο που χρησιμοποιείται ή συντίθεται ειδικά για να ανιχνευθεί εύκολα – τα αντισώματα στα αντίστοιχα αντιγόνα τους μπορούν στη συνέχεια να ταυτοποιηθούν και να προσδιοριστούν. Ο πιο κοινός τύπος συζυγούς αντισωμάτων είναι ένα φθορίζον μόριο, που επιτρέπει την ταυτοποίηση αντιγόνων στον ιστό κάτω από ένα φθορίζον μικροσκόπιο. Άλλα συζεύγματα περιλαμβάνουν μόρια όπως η υπεροξειδάση της ραπανίδας, η οποία χρησιμοποιείται σε σύζευξη με αντισώματα για μεταγενέστερη ανάπτυξη με διαμινοβενζιδίνη (DAB).

Συχνά τα πρωτογενή αντισώματα θα εγείρονται έναντι συγκεκριμένων αντιγόνων, ενώ τα δευτερεύοντα αντισώματα θα συζευγνύονται με τα μόρια σήμανσης και θα αναπτύσσονται έναντι του πρωτογενούς αντισώματος. Για παράδειγμα, κάποιος μπορεί να ενδιαφέρεται να αναγνωρίσει ένα αντιγόνο που ονομάζεται Αντιγόνο Χ. Στη συνέχεια θα χρησιμοποιήσει, για παράδειγμα, ένα αντίσωμα που αναπτύχθηκε σε ένα ποντίκι που αντιδρά και κολλάει στο Αντιγόνο Χ. Για να μπορέσει να βρει πού έχουν βρει αυτά τα πρωτεύοντα αντισώματα ποντικού και δεσμευμένο σε αυτά τα μόρια του Αντιγόνου Χ, στη συνέχεια θα χρησιμοποιηθεί ένα δευτερεύον αντίσωμα – για παράδειγμα, ένα που έχει εκτραφεί σε μια κατσίκα – που θα επισημαίνεται με ένα συζυγές που καθιστά αυτό το δευτερεύον αντίσωμα ανιχνεύσιμο είτε σε ενζυματικές είτε σε φθορίζουσες μικροσκοπικές δοκιμασίες. Για δοκιμές εντοπισμού αντιγόνων χρησιμοποιώντας ηλεκτρονικό μικροσκόπιο, τα σωματίδια χρυσού χρησιμοποιούνται συχνά ως συζυγές αντισώματος επειδή μπορούν να ανιχνευθούν χρησιμοποιώντας μια δέσμη ηλεκτρονίων.

Ο λόγος για τη χρήση πρωτογενών και δευτερογενών αντισωμάτων, αντί της χρήσης μιας σύζευξης αντισωμάτων στην οποία το πρωτεύον αντίσωμα είναι άμεσα συζευγμένο, είναι η σχέση κόστους-αποτελεσματικότητας. Η σύζευξη αντισωμάτων είναι ακριβή από άποψη χρόνου και αντιδραστηρίων. Ειδικά για ασυνήθιστα αντιγόνα, η σύζευξη αντισωμάτων στα πρωτογενή αντισώματα δεν αξίζει το κόστος παραγωγής. Μάλλον, χρησιμοποιώντας σύζευξη αντισωμάτων σε δευτερεύοντα αντισώματα, μεγάλες ποσότητες συζευγμένου αντισώματος μπορούν να συντεθούν ταυτόχρονα και να χρησιμοποιηθούν σε προσδιορισμούς με μια σειρά από πρωτογενή αντισώματα προσαρμοσμένα στον εντοπισμό πολλών διαφορετικών αντιγόνων, καθιστώντας τη διαδικασία παραγωγής αξιόλογη και οικονομικά αποδοτική.

Σε ορισμένες περιπτώσεις, ωστόσο, ένα πρωτεύον αντίσωμα θα επισημανθεί για τη μείωση του θορύβου στο σήμα ανίχνευσης λόγω της αυξημένης μη ειδικής σύνδεσης αντισώματος που προκύπτει από τη χρήση πολλαπλών αντισωμάτων. Ενώ αυτές οι δαπανηρές, εξαιρετικά ευαίσθητες δοκιμασίες θα απαιτούν ακόμα αυτή τη μέθοδο. Είναι δυνατή η αγορά κιτ που επιτρέπουν σε έναν ερευνητή να επισημάνει τα συζεύγματα στο δικό του αντίσωμα της επιλογής του, αυξάνοντας το κόστος του αντιδραστηρίου, αλλά μειώνοντας τα βήματα του πρωτοκόλλου και πιθανώς αυξάνοντας την αναλογία σήματος προς θόρυβο στον τελικό προσδιορισμό ανίχνευσης αντισωμάτων.