Ένα αντίσωμα συζευγμένο με ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC) είναι ένας φθορίζων μοριακός δείκτης εξαιρετικά ειδικός είτε για μια συγκεκριμένη πρωτεΐνη είτε για ένα πρωτογενές αντίσωμα. Χρησιμοποιούνται για την αναγνώριση πρωτεϊνών σε ανοσοκυτταροχημεία, προσδιορισμούς ενζυμικής και πρωτεϊνικής δραστηριότητας, κυτταρομετρία ροής και στύπωμα Western. Τα περισσότερα αντισώματα FITC μπορούν να αγοραστούν μέσω εξειδικευμένων εταιρειών μοριακής βιολογίας ή να κατασκευαστούν από μεμονωμένα ερευνητικά εργαστήρια.
Το FITC είναι ένα φθορόχρωμα που συχνά συζευγνύεται ή συνδέεται με ένα αντίσωμα για να δημιουργήσει έναν συγκεκριμένο, φθορίζοντα δείκτη. Όταν εκτίθενται σε ηλεκτρομαγνητική ενέργεια σε ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος, τα φθοριόχρωμα είναι χημικές ουσίες που απορροφούν την ενέργεια και εκπέμπουν ένα φωτόνιο σε ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος. Το FITC απορροφά ενέργεια στα 495 nm και εκπέμπει ένα φωτόνιο στα 521 nm. Κάθε φθοροχρώμιο έχει διαφορετικό εύρος απορρόφησης και εκπομπής, επιτρέποντας τη συστηματική ανίχνευση πολλών αντισωμάτων που συνδέονται με φθόριο σε ένα κομμάτι ιστού ή δείγματος. Αυτό είναι παρόμοιο με την επισήμανση διαφορετικών τμημάτων ενός κυττάρου με διαφορετικά χρώματα και στη συνέχεια τη χρήση εξειδικευμένων γυαλιών για να κοιτάξετε μόνο ένα χρώμα τη φορά.
Τα αντισώματα μπορούν να συνδεθούν ή να συζευχθούν με το μόριο FITC για να παραχθεί ένα αντίσωμα FITC. Αυτό το αντίσωμα FITC μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την άμεση ή έμμεση επισήμανση μιας πρωτεΐνης. Όταν ένα αντίσωμα FITC επισημαίνει απευθείας μια πρωτεΐνη, δρα ως το πρωτεύον αντίσωμα ή ως αντίσωμα σε άμεση επαφή με το αντιγόνο. Έμμεση χρήση ενός αντισώματος FITC συμβαίνει όταν χρησιμοποιείται ως δευτερεύον αντίσωμα, που συνδέεται ειδικά με ένα πρωτογενές αντίσωμα. Όταν ένα συζευγμένο αντίσωμα FITC χρησιμοποιείται απευθείας, η διαδικασία επισήμανσης διαρκεί λιγότερο χρόνο, αλλά η επισήμανση δεν είναι τόσο ισχυρή. Η έμμεση επισήμανση απαιτεί ένα επιπλέον βήμα, αλλά το σήμα ή η ετικέτα ενισχύεται επειδή πολλά δευτερεύοντα αντισώματα με επισήμανση FITC μπορούν να προσκολληθούν σε ένα μόνο πρωτεύον αντίσωμα.
Υπάρχουν πολλές χρήσεις για το αντίσωμα FITC στην κυτταρική και μοριακή βιολογία. Αυτός ο τύπος αντισώματος μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνος του ή σε συνδυασμό με άλλα μονοκλωνικά ή πολυκλωνικά αντισώματα για την επισήμανση συγκεκριμένων πρωτεϊνών εντός των κυττάρων σε μια τεχνική γνωστή ως ανοσοκυτταροχημεία. Τα αντισώματα FITC μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν σε τεχνικές όπως δοκιμασίες ενζυμικής και πρωτεϊνικής δραστηριότητας, κυτταρομετρία ροής και στύπωμα Western.
Τα συζευγμένα πρωτεύοντα και δευτερογενή αντισώματα FITC είναι ευρέως διαθέσιμα μέσω πολλών εταιρειών μοριακής βιολογίας. Είναι επίσης δυνατό για τα εργαστήρια να παρασκευάσουν τα δικά τους πρωτεύοντα αντισώματα και στη συνέχεια να χρησιμοποιήσουν ένα κιτ για να συζεύξουν το FITC με αυτά. Ορισμένες εταιρείες θα λάβουν εργαστηριακά παρασκευασμένα πρωτογενή αντισώματα και θα τα συζεύγουν με το φθοροχρώμιο FITC για ένα εργαστήριο. Τα συζευγμένα με FITC δευτερογενή αντισώματα δεν παράγονται συνήθως από μεμονωμένα ερευνητικά εργαστήρια και συνήθως αγοράζονται από εταιρείες που ειδικεύονται στην παραγωγή δευτερογενών αντισωμάτων.