Τι είναι η ανάλυση μετατόπισης ηλεκτροφορητικής κινητικότητας;

Μια δοκιμασία είναι μια δοκιμή που έχει σχεδιαστεί για να διαχωρίζει τα αρχικά κομμάτια ενός κυττάρου σε μέρη που είναι εύκολο να αναγνωριστούν. Η δοκιμασία μετατόπισης ηλεκτροφορητικής κινητικότητας είναι ένα πείραμα που χρησιμοποιεί ηλεκτρισμό για να μετακινήσει μακρομόρια, όπως πρωτεΐνες, μέσω μιας μήτρας γέλης για να προκαλέσει διαχωρισμό μεταξύ των διαφορετικών μακρομορίων με βάση το μέγεθος. Όπως μια μπαταρία αυτοκινήτου, το αρνητικό και το θετικό άκρο βρίσκονται στις αντίθετες πλευρές της ανάλυσης μετατόπισης ηλεκτροφορητικής κινητικότητας ή της ανάλυσης μετατόπισης γέλης. Αυτό προκαλεί τον ηλεκτρισμό να προσελκύει τα μακρομόρια με βάση το φορτίο. Κάθε μακρομόριο κινείται με διαφορετικό ρυθμό, καθώς τα μικρότερα αντιμετωπίζουν λιγότερη παρέμβαση από το τζελ.

Απαιτούνται διάφορα βήματα για τη δημιουργία μιας ηλεκτροφορητικής ανάλυσης μετατόπισης κινητικότητας. Τα μακρομόρια που πρέπει να διαχωριστούν πρέπει πρώτα να προετοιμαστούν. Τα περισσότερα μακρομόρια λαμβάνονται από ζωντανά κύτταρα και απαιτούν συγκεκριμένες διαδικασίες. Η απόκτηση των προς διαχωρισμό μερών απαιτεί συχνά μια φυγόκεντρο και μια χημική αντίδραση που διασπά τα κύτταρα. Η φυγόκεντρος θα περιστρέψει ένα φιαλίδιο με υψηλή ταχύτητα και θα σχηματίσει ένα σφαιρίδιο των μακρομορίων που χρειάζονται. Αυτό διαλύεται και συχνά προστίθεται ένα χρώμα ή άλλη ετικέτα για να βοηθήσει στην παρακολούθηση της ανάλυσης μετατόπισης γέλης.

Το τζελ, που μερικές φορές ονομάζεται κρεβάτι, πρέπει επίσης να είναι φρεσκοφτιαγμένο από ένα ακριβές μείγμα κονιοποιημένης αγαρόζης και νερού που μετατρέπεται γρήγορα από υγρό σε gel. Συνήθως ένας προσδιορισμός μετατόπισης ηλεκτροφορητικής κινητικότητας θα έχει πολλές λωρίδες για ξεχωριστούς προσδιορισμούς, οι οποίοι χρησιμοποιούνται για τη σύγκριση διαφορετικών μιγμάτων μακρομορίων. Μια λωρίδα ορίζεται πάντα ως έλεγχος και συνήθως έχει μόνο ένα είδος μακρομορίου.

Η πηγή τροφοδοσίας θα πρέπει να επιλεγεί προσεκτικά και να μην συνδεθεί μέχρι να είναι όλα έτοιμα. Ο χρόνος που είναι ενεργοποιημένος καθορίζει τη μετατόπιση κινητικότητας των μακρομορίων. Είναι σημαντικό να χωρίσετε τα κομμάτια αρκετά για σωστή ανάλυση. Εάν η ισχύς δεν έχει χρονομετρηθεί σωστά, οι μελλοντικές συγκρίσεις θα είναι επίσης ανακριβείς. Η κατεύθυνση των μακρομορίων θα καθοριστεί από το φορτίο που διαθέτουν φυσικά – τα περισσότερα κινούνται προς το αρνητικό άκρο.

Απλές γενετικές δοκιμές και αναλύσεις πρωτεϊνών γίνονται συνήθως με μια ηλεκτροφορητική ανάλυση μετατόπισης κινητικότητας. Αυτό εμφανίζεται με διαφορετικές βάρδιες σε διαφορετικές λωρίδες. Εάν συμβεί μια αλληλεπίδραση, τα μακρομόρια συνδυάζονται και διατρέχουν πιο αργά τη μήτρα σε σύγκριση με τη λωρίδα ελέγχου με ένα μόνο μακρομόριο. Οι αναλύσεις μετατόπισης γέλης χρησιμοποιούνται για την ταχεία εξάλειψη ή επιβεβαίωση γενετικών αποτελεσμάτων που οι περίπλοκες μέθοδοι θα μπορούσαν να χρειαστούν περισσότερο χρόνο για να ολοκληρωθούν. Μπορούν επίσης να προσδιορίσουν εάν τα αντισώματα, ένα μακρομόριο του ανοσοποιητικού συστήματος, προσκολλώνται σε πρωτεΐνες που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την καταπολέμηση βακτηρίων και ιών.