Ubiquitinarea se referă la legarea proteinei ubiquitinei de alte proteine de către trei enzime diferite. Un test de ubiquitinare este un test care determină cât de mult din acest proces are loc în interiorul celulei. Testele pot fi utilizate pentru a determina modul în care diferitele condiții afectează legarea proteinelor, etapele și structurile care sunt importante în calea ubiquitinnării și cantitatea de proteine din celulă. Cantitățile inadecvate sau supraabundente au fost legate de dezvoltarea multor boli diferite.
O proteină găsită în celule, funcția ubiquitinei este de a se lega de proteine în timp ce funcționează ca o „etichetă” sau semnal către alte structuri. Această „etichetă” semnalează apoi enzimelor să știe că proteina poate fi distrusă, reciclată sau mutată. Rezultatul este distrugerea sau transportul proteinelor.
Aceste proteine de marcare sunt importante pentru repararea ADN-ului, infecțiile virale și răspunsul imun. Alte funcții importante includ rolurile în moartea celulelor, diviziunea celulară și dezvoltarea celulelor. Prea multă ubiquitină sau lipsa acesteia poate juca un rol în formarea multor boli, cum ar fi cancerul, tulburările genetice și bolile sistemului imunitar.
Cercetătorii vor folosi un test de ubiquitinare pentru a încerca să determine ce condiții modifică concentrația proteinei în celulă și să compare celulele bolnave cu celulele sănătoase. Oamenii de știință îl folosesc, de asemenea, pentru a investiga ce condiții vor provoca modificări în legarea. În plus, ei pot încerca să lege codul ADN specific cu cantitatea de enzime din celulă.
Există mai mult de un tip de test de ubiquitinare pe care oamenii de știință le folosesc în mod specific. Se va determina procentul de proteine care sunt legate cu ubiquintin. Un altul examinează activitatea enzimelor sau prezența oricăror altor intermediari găsiți în calea de ubichinare. Sunt dezvoltate teste diferite pe baza proteinei țintă de care se va lega ubiquitina.
Baza unui test de ubiquitinare este de a încorpora un compus care este etichetat folosind o altă substanță chimică ușor de măsurat. În testele oncologice, ubiquitina poate fi marcată cu criptat, un compus care conține doi atomi de azot. Aceasta poate fi folosită pentru a determina care enzimă este cea mai activă în celulă.
Un test de ubiquitinare va avea doi pași. Prima este o etapă enzimatică în care enzimele vor lega ubiquitina marcată de proteina țintă. Al doilea este o etapă de detectare în care legarea proteinei țintă este examinată folosind un conjugat, cum ar fi un anticorp. Anticorpul va fluoresce sau își va schimba culoarea, ceea ce permite apoi cercetătorului să determine activitatea enzimelor.