Test immunoenzymatyczny (ELISA) jest powszechnym testem stosowanym w immunologii do wykrywania antygenów lub przeciwciał. Antygeny wywołują reakcję układu odpornościowego — innymi słowy powodują choroby. Test ELISA służy do wykrywania wielu antygenów bakteryjnych i wirusowych, w tym ludzkiego wirusa niedoboru odporności (HIV), malarii, cholery, odry i świnki. Do wykrywania przeciwciał przeciwko tym i wielu innym patogenom można zastosować nieco inny protokół ELISA. Protokół ELISA to krok po kroku procedura wykonywania określonego testu ELISA.
Chociaż protokół ELISA różni się nieznacznie, w zależności od rodzaju wykonywanego testu ELISA, podstawowa koncepcja jest dla nich taka sama. ELISA opiera się na przeciwciałach enzymatycznych, zwanych również antyglobulinami. Cząsteczka sygnałowa przyłączona do tych antyglobulin powoduje, że substrat dodawany podczas testu zmienia kolor, jeśli obecny jest żądany antygen lub przeciwciało. Ilość obecnego antygenu lub przeciwciała jest proporcjonalna do ilości zmiany koloru, którą można zmierzyć za pomocą elektronicznego czytnika płytek.
Istnieją trzy główne typy testu ELISA. Bezpośredni test ELISA jest zwykle używany do wykrywania antygenów, a nie przeciwciał. Jest to najprostszy protokół ELISA, ponieważ przeciwciało związane z enzymem wiąże się bezpośrednio z pożądanym antygenem. Następnie dodaje się substrat w celu określenia ilości obecnego antygenu.
Pośredni test ELISA służy do wykrywania przeciwciał, podczas gdy inny rodzaj pośredniego testu ELISA — zwany ELISA kanapkowy — może być używany do wykrywania antygenów. Protokół kanapkowy ELISA wymaga dwóch przeciwciał, zwanych przeciwciałami wychwytującymi i wykrywającymi, aby związać się z pożądanym antygenem. Dodaje się antyglobulinę, która wiąże się z przeciwciałem wykrywającym i dodaje się substrat. Pośredni test ELISA przebiega według podobnego protokołu, ale w celu wykrycia pożądanego przeciwciała wykorzystuje się raczej antygen wychwytujący niż przeciwciało wychwytujące.
Konkurencyjny test ELISA jest często używany do wykrywania antygenów występujących w niskich stężeniach, ponieważ jest to bardzo czuły test. W przeciwieństwie do innych protokołów ELISA, konkurencyjny test ELISA wykorzystuje antygen sprzężony z enzymem zamiast przeciwciała i nieco inną metodę oznaczania ilościowego. W nim próbka zawierająca antygen do wykrycia i antygen związany z enzymem są dodawane do przeciwciała i oba antygeny konkurują o miejsca wiązania przeciwciała. Po dodaniu substratu zmiana koloru jest większa, z wyższym stosunkiem związanych antygenów enzymatycznych do związanych antygenów próbki. Oznacza to, że przy niższych stężeniach antygenu próbki wykrywana jest większa zmiana koloru, co czyni tę metodę tak czułą.