Ubikwitynacja odnosi się do wiązania białka ubikwityny z innymi białkami przez trzy różne enzymy. Test ubikwitynacji to test, który określa, jaka część tego procesu zachodzi w komórce. Testy można wykorzystać do określenia, jak różne warunki wpływają na wiązanie białek, etapy i struktury, które są ważne w szlaku ubikwitynacji oraz ilość białka w komórce. Niewystarczające lub nadmierne ilości są powiązane z rozwojem wielu różnych chorób.
Białko znajdujące się w komórkach, funkcją ubikwityny jest wiązanie się z białkami, działając jako „znacznik” lub sygnał do innych struktur. Ten „znacznik” następnie sygnalizuje enzymom, że białko może zostać zniszczone, poddane recyklingowi lub przeniesione. Rezultatem jest zniszczenie lub transport białek.
Te białka znakujące są ważne dla naprawy DNA, infekcji wirusowych i odpowiedzi immunologicznej. Inne ważne funkcje obejmują role w śmierci komórki, podział komórkowy i rozwój komórek. Zbyt duża ilość ubikwityny lub jej brak może odgrywać rolę w powstawaniu wielu chorób, takich jak nowotwory, zaburzenia genetyczne czy choroby układu odpornościowego.
Naukowcy wykorzystają test ubikwitynacji, aby spróbować określić, które warunki zmieniają stężenie białka w komórce i porównać komórki chore ze zdrowymi. Naukowcy używają go również do zbadania, jakie warunki spowodują zmiany w wiązaniu. Dodatkowo mogą próbować powiązać konkretny kod DNA z ilością enzymów w komórce.
Istnieje więcej niż jeden rodzaj testu ubikwitynacji, z którego korzystają naukowcy. Określi się procent białek związanych z ubichintyną. Inny bada aktywność enzymów lub obecność jakichkolwiek innych związków pośrednich występujących na szlaku ubiquination. Opracowywane są różne testy w oparciu o białko docelowe, z którym będzie się wiązać ubikwityna.
Podstawą testu ubikwitynacji jest włączenie związku, który jest znakowany inną łatwo mierzalną substancją chemiczną. W testach onkologicznych ubikwitynę można znakować kryptatem, związkiem zawierającym dwa atomy azotu. Można to wykorzystać do określenia, który enzym jest najbardziej aktywny w komórce.
Test ubikwitynacji będzie składał się z dwóch etapów. Pierwszy to etap enzymatyczny, w którym enzymy wiążą znakowaną ubikwitynę z docelowym białkiem. Drugi to etap wykrywania, w którym wiązanie białka docelowego jest badane przy użyciu koniugatu, takiego jak przeciwciało. Przeciwciało będzie fluoryzować lub zmienić kolor, co następnie pozwoli naukowcowi określić aktywność enzymów.