Prawidłowe strojenie banjo to jeden z najważniejszych kroków w prawidłowej grze na instrumencie. Jednym z najważniejszych czynników do zapamiętania jest to, że najczęstszym strojeniem banjo jest klawisz G. Przed przystąpieniem do strojenia banjo ważne jest, aby zaopatrzyć się w rurkę stroikową, widelec lub tuner elektroniczny, aby właściwie ustalić klucz, na którym można oprzeć strojenie. Kolejną wskazówką jest ciągłe wybieranie lub szarpanie strojonej struny podczas strojenia główki kołka. W przypadku graczy niepewnych co do właściwego tonu, najlepiej jest zatrzymać się przed pożądanym strojeniem podczas strojenia banjo, ponieważ pozwoli to uniknąć zerwania strun w wyniku nadmiernego naprężenia.
Podczas gdy wiele alternatywnych scenariuszy strojenia pojawia się podczas grania w dowolnym stylu muzycznym, typowym i rozpoznawanym klawiszem podczas strojenia banjo jest klucz G. To strojenie na standardowym pięciostrunowym banjo, od góry lub najkrótszej struny na banjo do dolna struna to GDGB D. Te strojenia są wykonywane przy strunach w pozycji otwartej lub bez naciskania na strojoną strunę. Kolejną wskazówką podczas strojenia banjo jest stłumienie strun, które nie są strojone ręką chwytającą. Pomoże to wyeliminować wszelkie niepożądane wibracje strun, które zakłócają słyszenie strojonej struny.
Aby uniknąć zerwania strun w wyniku nadmiernego naprężenia oraz aby pomóc w określeniu właściwego stroju, struna powinna być stale podnoszona podczas naciągania lub luzowania kołka stroikowego. Umożliwi to słyszenie tonacji struny, która stale zmienia się z niskiego na wysoki w miarę napinania. Najlepiej też nigdy nie zostawiać nastrojonej struny po osiągnięciu wysokości przez poluzowanie jej. Po osiągnięciu właściwego stroju zawsze najlepiej jest nieco rozstroić, a następnie przywrócić tonację struny w miarę jej naciągania.
Ważną wskazówką dotyczącą strojenia banjo, zwłaszcza podczas gry z innymi instrumentami w zespole, jest porównanie strojenia z innym instrumentem. Tolerancje w produkcji i inne kwestie mogą pozostawić dwa identycznie nastrojone instrumenty o oktawę lub więcej od siebie w porównaniu do siebie. Można to osiągnąć po zakończeniu strojenia banjo, po prostu porównując wybrane struny ze strunami innego instrumentu. Ten proces jest często używany jako ostatni etap strojenia banjo.