Metoda ELISA este un test care este utilizat în imunologie și în alte domenii științifice pentru a detecta anticorpi și antigeni. ELISA înseamnă test imunosorbent legat de enzime, care se referă la faptul că anticorpii cuplati la enzime sunt utilizați pentru a determina rezultatele testului. Metoda ELISA este utilizată în medicină pentru a detecta anticorpii împotriva bolilor ca măsură de diagnostic și este o tehnică comună folosită în cercetarea imunologică și biochimică.
Testul ELISA a fost dezvoltat în anii 1960 și 1970 ca un înlocuitor pentru testarea imunologică care a implicat utilizarea anticorpilor radioactivi și a antigenelor. Riscurile utilizării materialelor radioactive au făcut ca procesul de testare să fie greu de sigur, iar apariția metodei ELISA a rezolvat ambele probleme. În loc să folosească materiale radioactive pentru a determina rezultatele unui test, ELISA utilizează enzime care reacţionează cu anticorpii pentru a forma produse colorate. Dezvoltarea culorii într-un test ELISA indică un rezultat pozitiv.
Există mai multe tipuri diferite de teste ELISA. Metoda ELISA cel mai frecvent utilizată se numește ELISA indirectă; acesta este un test de anticorpi utilizat pentru a determina dacă un anumit tip de anticorp este prezent într-o probă și la ce concentrație. În medicina de diagnostic, acest test este utilizat pentru a detecta prezența anticorpilor împotriva bolilor infecțioase precum HIV, hepatită și altele. Prezența anticorpilor împotriva acestor boli indică faptul că individul testat a fost expus la agenții infecțioși. De obicei, proba utilizată este din sângele unui pacient.
În acest test, o proteină antigenă specifică este utilizată pentru a acoperi o placă de microtitrare. Această placă mică de plastic conține 96 de godeuri minuscule și un singur test ELISA poate fi efectuat în fiecare godeu. Antigenul utilizat pentru un anumit test depinde de tipul de anticorp pe care testul încearcă să îl detecteze. De exemplu, dacă ELISA este utilizat pentru un test HIV, antigenul utilizat ar fi specific acestui virus.
Pe măsură ce testul se desfășoară, cantități mici de probă necunoscută sunt adăugate în fiecare godeu al plăcii de microtitrare, iar placa este incubată pentru a permite anticorpilor din probă să se lege de antigen. Apoi, se adaugă un anticorp secundar de detectare în fiecare godeu al plăcii. Dacă proba conține oricare dintre tipurile de anticorpi pentru care este testat, aceasta se va lega de anticorpul de detectare secundar în perioada de incubație ulterioară.
Cheia metodei ELISA este că anticorpul secundar este marcat cu un anumit tip de enzimă. Enzima utilizată este capabilă să schimbe culoarea probei de testat atunci când reacţionează cu substratul său. Prin urmare, dacă o probă conține oricare dintre anticorpii pentru care se testează, adăugarea substratului într-un godeu va determina schimbarea culorii acestuia, datorită prezenței anticorpului secundar și a enzimei asociate acestuia.
Există și alte variante ale metodei ELISA, inclusiv un test numit ELISA sandwich. Acesta este folosit pentru a detecta antigenele dintr-o probă, mai degrabă decât anticorpii. În acest test, placa de microtitrare este acoperită cu o probă standardizată de anticorp. Apoi, se adaugă proba de testare a antigenului, urmată de adăugarea anticorpului secundar de detectare și a enzimei asociate acestuia. Ca și în cazul ELISA indirect, formarea unui produs colorat indică un rezultat pozitiv.