Un anticorp conjugat cu izotiocianat de fluoresceină (FITC) este un marker molecular fluorescent foarte specific fie pentru o anumită proteină, fie pentru un anticorp primar. Ele sunt utilizate pentru a identifica proteinele în imunocitochimie, testele de activitate a enzimelor și proteinelor, citometria în flux și Western blot. Majoritatea anticorpilor FITC pot fi achiziționați de la companii specializate în biologie moleculară sau fabricați de laboratoare individuale de cercetare.
FITC este un fluorocrom adesea conjugat sau legat de un anticorp pentru a face un marker specific, fluorescent. Când sunt expuși la energie electromagnetică la o anumită lungime de undă, fluorocromii sunt substanțe chimice care vor absorbi energia și vor emite un foton la o anumită lungime de undă. FITC absoarbe energie la 495 nm și emite un foton la 521 nm. Fiecare fluorocrom are o gamă diferită de absorbție și emisie, permițând detectarea sistematică a multor anticorpi legați de fluorcrom într-o singură bucată de țesut sau probă. Acest lucru este similar cu etichetarea diferitelor părți ale unei celule cu culori diferite și apoi utilizarea ochelarilor specializați pentru a privi o singură culoare la un moment dat.
Anticorpii pot fi legați sau conjugați la molecula FITC pentru a produce un anticorp FITC. Acest anticorp FITC poate fi utilizat pentru a marca direct sau indirect o proteină. Când un anticorp FITC etichetează direct o proteină, acesta acționează ca anticorp primar sau ca anticorp în contact direct cu antigenul. Utilizarea indirectă a unui anticorp FITC are loc atunci când este utilizat ca anticorp secundar, legându-se în mod specific la un anticorp primar. Când un anticorp conjugat FITC este utilizat direct, procedura de etichetare durează mai puțin, dar etichetarea nu este la fel de puternică. Etichetarea indirectă necesită un pas suplimentar, dar semnalul sau eticheta este amplificată deoarece mai mulți anticorpi secundari marcați cu FITC se pot atașa la un singur anticorp primar.
Există multe utilizări pentru anticorpul FITC în biologia celulară și moleculară. Acest tip de anticorp poate fi utilizat singur sau în combinație cu alți anticorpi monoclonali sau policlonali pentru a marca proteine specifice din celule într-o tehnică cunoscută sub numele de imunocitochimie. Anticorpii FITC pot fi, de asemenea, utilizați în tehnici precum testele de activitate a enzimelor și proteinelor, citometria în flux și Western blotting.
Anticorpii primari și secundari conjugați cu FITC sunt disponibili pe scară largă prin multe companii de biologie moleculară. Este, de asemenea, posibil ca laboratoarele să își pregătească proprii anticorpi primari și apoi să folosească un kit pentru a conjuga FITC cu ei. Unele companii vor lua anticorpi primari pregătiți în laborator și îi vor conjuga cu fluorocromul FITC pentru un laborator. Anticorpii secundari conjugați cu FITC nu sunt fabricați de obicei de laboratoarele de cercetare individuale și sunt de obicei achiziționați de la companii specializate în producerea de anticorpi secundari.