Μια ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) είναι μια δοκιμή που πραγματοποιείται σε εργαστήριο ανοσολογίας για τον προσδιορισμό των επιπέδων πρωτεΐνης σε ένα βιολογικό δείγμα. Η ανίχνευση ELISA αναφέρεται στο τελικό στάδιο της δοκιμής στο οποίο ένα διαυγές διάλυμα ή υπόστρωμα προστίθεται σε μια πλαστική πλάκα που περιέχει δεσμευμένο σημασμένο με ένζυμο αντίσωμα. Το ένζυμο διασπά το υπόστρωμα και εμφανίζεται μια αλλαγή χρώματος. Η απορρόφηση φωτός του τελικού έγχρωμου διαλύματος στη συνέχεια μετράται σε συσκευή ανάγνωσης πλακών ELISA ή φασματοφωτόμετρο.
Υπάρχουν διάφοροι τύποι δοκιμών ELISA, με τις δύο πιο συνηθισμένες να είναι η έμμεση ELISA και η σύλληψη ή σάντουιτς ELISA. Η έμμεση ELISA χρησιμοποιείται για την ανίχνευση μιας πρωτεΐνης, γνωστής ως αντίσωμα, στον ορό ενός ασθενούς. Ένα παράδειγμα έμμεσης δοκιμής ELISA είναι το τεστ για τον ιό της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV) που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αντισωμάτων κατά του HIV. Το τεστ ELISA σάντουιτς ανιχνεύει μια πρωτεΐνη, ή αντιγόνο, δεσμεύοντάς την ανάμεσα σε δύο αντισώματα. Η ανίχνευση της ορμόνης ανθρώπινης χοριακής γοναδοτροπίνης (hCG), η οποία είναι αυξημένη κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, γίνεται με τεστ ELISA σάντουιτς.
Και οι δύο δοκιμές έχουν ένα βήμα ανίχνευσης ELISA στο τέλος της ανάλυσης. Αυτό το βήμα περιλαμβάνει την προσθήκη ενός αντισώματος που έχει ένα μόριο ενζύμου συνδεδεμένο σε αυτό. Μετά την προσθήκη του επισημασμένου με ένζυμο αντισώματος, προστίθεται ένα άχρωμο διάλυμα, που περιέχει το μόριο υποστρώματος που είναι ειδικό για αυτό το ένζυμο. Το ένζυμο διασπά το μόριο του υποστρώματος και το διάλυμα αλλάζει χρώμα ανάλογα με τον συνδυασμό που χρησιμοποιείται. Ο προσδιορισμός της ποσότητας αντισώματος ή αντιγόνου στο δείγμα ασθενούς γίνεται με μέτρηση της έντασης της αλλαγής χρώματος.
Υπάρχουν διάφοροι συνδυασμοί ενζυμικών υποστρωμάτων που είναι διαθέσιμοι για χρήση στο στάδιο ανίχνευσης ELISA. Το πιο κοινό ένζυμο είναι η υπεροξειδάση του αγριοραπανιού (HRP), η οποία μπορεί να διασπάσει τα μόρια του υποστρώματος διυδροχλωρική ορθο-φαινυλενοδιαμίνη (OPD) και τετραμεθυλβενζιδίνη (TMB), μεταξύ άλλων. Η διάσπαση τόσο του OPD όσο και του TMB έχει ως αποτέλεσμα ένα κίτρινο χρώμα και η οπτική πυκνότητα ή η απορρόφηση του φωτός αυτών των υποστρωμάτων μετράται από έναν αναγνώστη πλακών ELISA. Η απορρόφηση φωτός του OPD μετράται σε μήκος κύματος 490 νανόμετρα (nm) ενώ το TMB μετράται στα 450 nm.
Ένα άλλο κοινό ένζυμο που χρησιμοποιείται στο στάδιο ανίχνευσης ELISA είναι η αλκαλική φωσφατάση. Αυτό το ένζυμο χρησιμοποιείται με το υπόστρωμα φωσφορικό p-νιτροφαινυλεστέρα (PNPP) και παράγει επίσης ένα κίτρινο διάλυμα. Το PNPP απορροφά φως σε μήκος κύματος 405 nm.
Η επιλογή των συνδυασμών υποστρώματος ενζύμου βασίζεται συνήθως στο ποια αντισώματα σημασμένα με ένζυμα είναι διαθέσιμα στο εμπόριο, καθώς και στον εξοπλισμό που θα χρησιμοποιηθεί για τη μέτρηση της απορρόφησης φωτός. Οι πολλοί διαθέσιμοι συνδυασμοί για την ανίχνευση ELISA καθιστούν τη δοκιμή ELISA εξαιρετικά ευέλικτη. Είναι ένα σημαντικό εργαλείο στα εργαστήρια δοκιμών ασθενειών και έρευνας.