Μια ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) είναι μια κοινή δοκιμή που χρησιμοποιείται στην ανοσολογία για την ανίχνευση αντιγόνων ή αντισωμάτων. Τα αντιγόνα προκαλούν μια αντίδραση του ανοσοποιητικού συστήματος — με άλλα λόγια, προκαλούν ασθένειες. Το ELISA χρησιμοποιείται για την ανίχνευση πολλών βακτηριακών και ιικών αντιγόνων, συμπεριλαμβανομένων του ιού της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV), της ελονοσίας, της χολέρας, της ιλαράς και της παρωτίτιδας. Ένα ελαφρώς διαφορετικό πρωτόκολλο ELISA μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση αντισωμάτων σε αυτά και πολλά άλλα παθογόνα. Ένα πρωτόκολλο ELISA είναι η βήμα προς βήμα διαδικασία για την εκτέλεση μιας συγκεκριμένης ELISA.
Αν και το πρωτόκολλο ELISA ποικίλλει ελαφρώς, ανάλογα με τον τύπο του ELISA που εκτελείται, η βασική ιδέα είναι η ίδια για όλα. Η ELISA εξαρτάται από αντισώματα που συνδέονται με ένζυμα, που ονομάζονται επίσης αντισφαιρίνες. Ένα μόριο σήματος συνδεδεμένο σε αυτές τις αντισφαιρίνες προκαλεί την αλλαγή χρώματος ενός υποστρώματος που προστίθεται κατά τη διάρκεια της ανάλυσης, εάν υπάρχει το επιθυμητό αντιγόνο ή αντίσωμα. Η ποσότητα του αντιγόνου ή του αντισώματος που υπάρχει είναι ανάλογη με την ποσότητα της αλλαγής χρώματος, η οποία μπορεί να μετρηθεί με μια ηλεκτρονική συσκευή ανάγνωσης πλακών.
Υπάρχουν τρεις κύριοι τύποι ELISA. Μια άμεση ELISA χρησιμοποιείται συνήθως για την ανίχνευση αντιγόνων και όχι αντισωμάτων. Αυτό είναι το απλούστερο πρωτόκολλο ELISA, καθώς το συνδεδεμένο με ένζυμο αντίσωμα συνδέεται απευθείας με το επιθυμητό αντιγόνο. Στη συνέχεια προστίθεται υπόστρωμα για να προσδιοριστεί η ποσότητα του αντιγόνου που υπάρχει.
Μια έμμεση ELISA χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αντισωμάτων, ενώ ένας άλλος τύπος έμμεσης ELISA – που ονομάζεται ELISA σάντουιτς – μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση αντιγόνων. Ένα πρωτόκολλο ELISA σάντουιτς απαιτεί δύο αντισώματα, που ονομάζονται αντισώματα σύλληψης και ανίχνευσης, για να συνδεθούν στο επιθυμητό αντιγόνο. Προστίθεται μια αντισφαιρίνη, η οποία συνδέεται με το αντίσωμα ανίχνευσης και προστίθεται το υπόστρωμα. Η έμμεση ELISA ακολουθεί ένα παρόμοιο πρωτόκολλο, αλλά χρησιμοποιεί ένα αντιγόνο σύλληψης αντί ένα αντίσωμα σύλληψης για να ανιχνεύσει το επιθυμητό αντίσωμα.
Η ανταγωνιστική ELISA χρησιμοποιείται συχνά για την ανίχνευση αντιγόνων που υπάρχουν σε χαμηλές συγκεντρώσεις, επειδή είναι μια πολύ ευαίσθητη ανάλυση. Σε αντίθεση με τα άλλα πρωτόκολλα ELISA, η ανταγωνιστική ELISA χρησιμοποιεί ένα αντιγόνο που συνδέεται με ένζυμα αντί για ένα αντίσωμα και μια ελαφρώς διαφορετική μέθοδο ποσοτικοποίησης. Σε αυτό, το δείγμα που περιέχει το προς ανίχνευση αντιγόνο και το συνδεδεμένο με ένζυμο αντιγόνο προστίθενται και τα δύο σε ένα αντίσωμα και τα δύο αντιγόνα ανταγωνίζονται για θέσεις δέσμευσης αντισωμάτων. Όταν προστίθεται το υπόστρωμα, η αλλαγή χρώματος είναι μεγαλύτερη, με υψηλότερη αναλογία δεσμευμένων ενζυμικών αντιγόνων προς δεσμευμένα αντιγόνα δείγματος. Αυτό σημαίνει ότι υψηλότερη αλλαγή χρώματος ανιχνεύεται σε χαμηλότερες συγκεντρώσεις του αντιγόνου του δείγματος, κάτι που κάνει αυτή τη μέθοδο τόσο ευαίσθητη.