Η μέθοδος ELISA είναι ένα τεστ που χρησιμοποιείται στην ανοσολογία και σε άλλα επιστημονικά πεδία για την ανίχνευση αντισωμάτων και αντιγόνων. Το ELISA σημαίνει ανοσοπροσροφητικός προσδιορισμός συνδεδεμένος με ένζυμα, ο οποίος αναφέρεται στο γεγονός ότι αντισώματα συζευγμένα με ένζυμα χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό των αποτελεσμάτων της δοκιμής. Η μέθοδος ELISA χρησιμοποιείται στην ιατρική για την ανίχνευση αντισωμάτων σε ασθένειες ως διαγνωστικό μέτρο και είναι μια κοινή τεχνική που χρησιμοποιείται στην ανοσολογική και βιοχημική έρευνα.
Το τεστ ELISA αναπτύχθηκε στις δεκαετίες του 1960 και του 1970 ως αντικατάσταση του ανοσολογικού ελέγχου που περιελάμβανε τη χρήση ραδιενεργών αντισωμάτων και αντιγόνων. Οι κίνδυνοι από τη χρήση ραδιενεργών υλικών κατέστησαν τη διαδικασία δοκιμών δυσκίνητη και μη ασφαλή και η έλευση της μεθόδου ELISA έλυσε και τα δύο αυτά προβλήματα. Αντί να χρησιμοποιεί ραδιενεργά υλικά για τον προσδιορισμό των αποτελεσμάτων μιας δοκιμής, η ELISA χρησιμοποιεί ένζυμα που αντιδρούν με αντισώματα για να σχηματίσουν έγχρωμα προϊόντα. Η ανάπτυξη χρώματος σε μια δοκιμή ELISA υποδεικνύει θετικό αποτέλεσμα.
Υπάρχουν διάφοροι τύποι εξετάσεων ELISA. Η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη μέθοδος ELISA ονομάζεται έμμεση ELISA. Αυτή είναι μια δοκιμή αντισωμάτων που χρησιμοποιείται για να προσδιοριστεί εάν ένας συγκεκριμένος τύπος αντισώματος υπάρχει σε ένα δείγμα και σε ποια συγκέντρωση. Στη διαγνωστική ιατρική, αυτή η εξέταση χρησιμοποιείται για την ανίχνευση της παρουσίας αντισωμάτων σε μολυσματικές ασθένειες όπως ο HIV, η ηπατίτιδα και άλλες. Η παρουσία αντισωμάτων σε αυτές τις ασθένειες δείχνει ότι το άτομο που εξετάζεται έχει εκτεθεί στους μολυσματικούς παράγοντες. Συνήθως, το δείγμα που χρησιμοποιείται είναι αίμα ασθενούς.
Σε αυτή τη δοκιμή, χρησιμοποιείται μια ειδική πρωτεΐνη αντιγόνου για την επικάλυψη μιας πλάκας μικροτιτλοδότησης. Αυτή η μικρή πλαστική πλάκα περιέχει 96 μικροσκοπικά φρεάτια και μπορεί να πραγματοποιηθεί μία μόνο δοκιμή ELISA σε κάθε φρεάτιο. Το αντιγόνο που χρησιμοποιείται για μια δεδομένη εξέταση εξαρτάται από τον τύπο του αντισώματος που προσπαθεί να ανιχνεύσει η εξέταση. Για παράδειγμα, εάν η ELISA χρησιμοποιηθεί για τεστ HIV, το αντιγόνο που χρησιμοποιείται θα είναι ειδικό για αυτόν τον ιό.
Καθώς η δοκιμή προχωρά, μικρές ποσότητες του άγνωστου δείγματος προστίθενται σε κάθε φρεάτιο της πλάκας μικροτιτλοδότησης και η πλάκα επωάζεται για να επιτρέψει χρόνο για τα αντισώματα στο δείγμα να συνδεθούν με το αντιγόνο. Στη συνέχεια, ένα δευτερεύον αντίσωμα ανίχνευσης προστίθεται σε κάθε φρεάτιο της πλάκας. Εάν το δείγμα περιέχει οποιοδήποτε από τον τύπο αντισώματος για τον οποίο ελέγχεται, θα δεσμευτεί στο δευτερεύον αντίσωμα ανίχνευσης κατά την επόμενη περίοδο επώασης.
Το κλειδί για τη μέθοδο ELISA είναι ότι το δευτερεύον αντίσωμα επισημαίνεται με ένα συγκεκριμένο είδος ενζύμου. Το ένζυμο που χρησιμοποιείται μπορεί να αλλάξει το χρώμα του δείγματος δοκιμής όταν αυτό αντιδρά με το υπόστρωμά του. Επομένως, εάν ένα δείγμα περιέχει οποιοδήποτε από το αντίσωμα που ελέγχεται, η προσθήκη του υποστρώματος σε ένα φρεάτιο θα προκαλέσει αλλαγή χρώματος, λόγω της παρουσίας του δευτερογενούς αντισώματος και του σχετικού ενζύμου.
Υπάρχουν και άλλες παραλλαγές στη μέθοδο ELISA, συμπεριλαμβανομένης μιας δοκιμής που ονομάζεται ELISA σάντουιτς. Αυτό χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αντιγόνων σε ένα δείγμα, αντί για αντισώματα. Σε αυτή τη δοκιμή, η πλάκα μικροτιτλοδότησης επικαλύπτεται με ένα τυποποιημένο δείγμα αντισώματος. Στη συνέχεια, προστίθεται το δείγμα δοκιμής αντιγόνου, ακολουθούμενο από την προσθήκη του δευτερογενούς αντισώματος ανίχνευσης και του σχετικού ενζύμου. Όπως και με την έμμεση ELISA, ο σχηματισμός ενός έγχρωμου προϊόντος υποδηλώνει θετικό αποτέλεσμα.