Τι είναι η δοκιμή πυρογόνου;

Η δοκιμή πυρογόνου ορίζει μια διαδικασία που χρησιμοποιείται από τους κατασκευαστές φαρμάκων για να προσδιορίσουν εάν υπάρχουν βακτηριακές τοξίνες σε εμβόλια και φάρμακα που μπορεί να προκαλέσουν πυρετό όταν χρησιμοποιούνται σε ανθρώπους. Καθορίζει εάν τα μικρόβια ή οι μεταβολίτες τους υπάρχουν σε ενδοφλέβια διαλύματα κατά τη διαδικασία παρασκευής. Η πιο κοινή και παλαιότερη μορφή δοκιμής πυρετογόνου συνίσταται στην έγχυση φαρμάκων σε κουνέλια για να διαπιστωθεί εάν αναπτύσσεται πυρετός. Ένα νεότερο τεστ χρησιμοποιεί αίμα από το πέταλο για τον έλεγχο τοξινών.

Η μέθοδος δοκιμής πυρετογόνου σε κουνέλι εμφανίστηκε τη δεκαετία του 1940 αφού ορισμένοι ασθενείς αρρώστησαν από ενδοφλέβια φάρμακα. Οι υποδερμικές συσκευές εκείνη την εποχή αποδείχτηκαν χρήσιμες για τη χορήγηση φαρμάκων απευθείας στην κυκλοφορία του αίματος για ασθενείς που δεν ήταν σε θέση να ανεχθούν τα από του στόματος φάρμακα. Παρόλο που οι υποδερμικές συσκευές ήταν στείρες, τα φάρμακα δεν ήταν πάντα ασφαλή.

Οι ασθενείς ανέπτυξαν μερικές φορές υψηλό πυρετό, ρίγη και πόνους στο σώμα και μερικοί άνθρωποι υπέστησαν σοκ. Οι γιατροί δεν ήξεραν γιατί συνέβη αυτό, αποκαλώντας συχνά την κατάσταση πυρετό με ένεση, πυρετό με φυσιολογικό ορό ή πυρετό απεσταγμένου νερού. Αργότερα, οι ερευνητές ανακάλυψαν ότι ορισμένα φάρμακα και εμβόλια είχαν μολυνθεί σε εργαστήρια παραγωγής με πυρετογόνες ενδοτοξίνες, ισχυρά βακτήρια που αντέχουν στην αποστείρωση.

Το ανθρώπινο σώμα καταπολεμά την έκθεση σε βακτηριακές τοξίνες στο περιβάλλον μέσω του δέρματος. Όταν τα μολυσμένα φάρμακα εγχέονται στην κυκλοφορία του αίματος, οι τοξίνες παρακάμπτουν τους κανονικούς αμυντικούς μηχανισμούς. Τα λευκά αιμοσφαίρια αρχίζουν να απελευθερώνουν μια άλλη μορφή πυρετογόνου που προκαλεί υψηλό πυρετό, που μπορεί να οδηγήσει σε σοκ και θάνατο.

Οι δοκιμές πυρογόνων σε εργαστήρια φαρμάκων περιλαμβάνουν εξοπλισμό θέρμανσης που χρησιμοποιείται για τη διασφάλιση της αποστείρωσης. Το φάρμακο εγχέεται στις φλέβες του αυτιού των κουνελιών για να διαπιστωθεί εάν αναπτύσσεται πυρετός. Οι θερμοκρασίες του ορθού των πειραματόζωων αναλύονται μετά από 30 λεπτά και ξανά μία έως τρεις ώρες αργότερα. Εάν τα ζώα παραμένουν ελεύθερα πυρετού, το διάλυμα είναι απαλλαγμένο από τοξίνες.

Η διαδικασία της δοκιμής πυρετογόνου σε ζώα συνήθως περιλαμβάνει την ένεση πολλών κουνελιών κάθε φορά μέσα σε ένα χρονικό πλαίσιο 10 λεπτών. Η δοσολογία για κάθε κουνέλι εξαρτάται από το σωματικό βάρος, την ηλικία και το φύλο. Η ίδια ομάδα κουνελιών μπορεί να ελέγχεται επανειλημμένα κάθε λίγες μέρες μέχρι να αναπτύξει ανοχή στα φάρμακα.
Μια νεότερη τεχνική δοκιμής πυρετογόνου ονομάζεται η δοκιμή λύματος αμωβοκυττάρων limulus (LAL). Το αίμα από πεταλοειδή καβούρια περιέχει υψηλά επίπεδα τοξινών που βρίσκονται φυσικά στη θαλάσσια ζωή. Οι επιστήμονες ανακάλυψαν έναν τρόπο να χρησιμοποιούν το αίμα για τον έλεγχο της βακτηριακής τοξίνης στα φάρμακα και τις πρώτες ύλες που χρησιμοποιούνται για την παρασκευή φαρμάκων. Η διαδικασία δοκιμής πυρετογόνου LAL μπορεί να είναι 100 φορές πιο ευαίσθητη από τις μεθόδους δοκιμής σε κουνέλι. Οι ιατρικές συσκευές που εμφυτεύονται σε ανθρώπους υποβάλλονται σε δοκιμή LAL, μαζί με ραδιενεργά φάρμακα και αναισθησία.