Un test imunosorbent legat de enzime (ELISA) este un test comun utilizat în imunologie pentru a detecta antigene sau anticorpi. Antigenele provoacă o reacție a sistemului imunitar – cu alte cuvinte, provoacă boli. ELISA este utilizat pentru a detecta multe antigene bacteriene și virale, inclusiv virusul imunodeficienței umane (HIV), malarie, holeră, rujeolă și oreion. Un protocol ELISA ușor diferit poate fi utilizat pentru a detecta anticorpi la aceștia și mulți alți agenți patogeni. Un protocol ELISA este procedura pas cu pas pentru efectuarea unui anumit ELISA.
Deși protocolul ELISA variază ușor, în funcție de tipul de ELISA efectuat, conceptul de bază este același pentru toate. ELISA depinde de anticorpii legați de enzime, numiți și antiglobuline. O moleculă semnal atașată la aceste antiglobuline face ca un substrat adăugat în timpul testului să își schimbe culoarea, dacă antigenul sau anticorpul dorit este prezent. Cantitatea de antigen sau anticorp prezent este proporțională cu cantitatea de schimbare a culorii, care poate fi măsurată cu un cititor electronic de plăci.
Există trei tipuri principale de ELISA. Un ELISA direct este de obicei utilizat pentru a detecta antigene mai degrabă decât anticorpi. Acesta este cel mai simplu protocol ELISA, deoarece anticorpul legat de enzimă se leagă direct de antigenul dorit. Apoi se adaugă substrat pentru a determina cantitatea de antigen prezentă.
Un ELISA indirect este utilizat pentru a detecta anticorpi, în timp ce un alt tip de ELISA indirect – numit ELISA sandwich – poate fi utilizat pentru a detecta antigenele. Un protocol ELISA tip sandwich necesită doi anticorpi, numiți anticorpi de captare și detecție, pentru a se lega de antigenul dorit. Se adaugă o antiglobulină, care se leagă de anticorpul de detectare, și se adaugă substratul. ELISA indirectă urmează un protocol similar, dar utilizează un antigen de captare mai degrabă decât un anticorp de captură pentru a detecta anticorpul dorit.
ELISA competitiv este adesea folosit pentru detectarea antigenelor care sunt prezente în concentrații scăzute, deoarece este un test foarte sensibil. Spre deosebire de celelalte protocoale ELISA, ELISA competitivă folosește un antigen legat de enzime în loc de anticorp și o metodă de cuantificare ușor diferită. În acesta, proba care conține antigenul care trebuie detectat și antigenul legat de enzimă sunt ambele adăugate la un anticorp, iar cele două antigene concurează pentru situsurile de legare a anticorpilor. Când se adaugă substratul, schimbarea culorii este mai mare, cu un raport mai mare dintre antigenele legați de enzime și antigenele de probă legați. Aceasta înseamnă că o schimbare mai mare a culorii este detectată la concentrații mai mici ale antigenului de probă, ceea ce face ca această metodă să fie atât de sensibilă.