Masło mlekowe produkowane jest z pełnego mleka, które zostało sfermentowane kwasem mlekowym. Charakteryzuje się niską zawartością wilgoci i pikantnym smakiem, który niektórzy uważają za preferowany niż masło ze słodkiej śmietanki. W zależności od tego, gdzie dana osoba jest na świecie, ten produkt może być lub nie być łatwy do znalezienia; jest łatwo dostępny w Europie. Może być również robiony w domu, przez osoby, które potrafią utrzymać sterylne warunki do wyrobu masła.
Masło z mleka krowiego dzieli się na dwa rodzaje: masło mlekowe i masło śmietankowe. Tradycyjnie masło mlekowe było wytwarzane przez pozostawienie mleka na kilka dni, co sprzyjałoby tworzeniu korzystnego kwasu mlekowego, fermentując mleko do produktu prawie jak jogurt, który można następnie ubić na masło. Masło ze słodkiej śmietany jest wytwarzane ze świeżego mleka, które jest odtłuszczone w celu oddzielenia śmietanki od mleka. Tylko śmietanka jest ubijana na słodką śmietankę, podczas gdy mleko jest używane gdzie indziej.
Po ubiciu każdego rodzaju masła, zwykle jest ono myte przed zapakowaniem i może być również solone, aby zachować stabilność podczas przechowywania. Tradycyjnie solone masło było mocno solone, a świeże masło było rzadkim przysmakiem; najnowocześniejsze masło jest tylko lekko solone, aby przywołać smak staromodnego masła. Podobnie jak masło ze słodkiej śmietanki, mleko mlekowe jest dostępne w wersjach solonych lub niesolonych i doskonale nadaje się do pieczenia; niektórzy ludzie uważają, że faktycznie daje lepsze wypieki ze względu na niższą wilgotność. Ma również wyższy punkt wędzenia niż masło ze słodkiej śmietanki, co sprawia, że jest preferowanym masłem do gotowania w niektórych regionach świata.
Niektórzy producenci nazywają swoje produkty masłem hodowlanym, w odniesieniu do kultur, którymi zaszczepia się pełne mleko, aby naśladować warunki kilkudniowego siedzenia w celu fermentacji. Inni mogą odnosić się do niego jako „dojrzałe masło”, również w odniesieniu do dojrzewania tych kultur.
Inaczej smakują też słodkie masła śmietankowe i mlekowe. Odmiana mleczna ma pełny, bogaty kremowy smak z nutą posmaku, natomiast masło śmietankowe jest bardziej słodkie i płaskie w smaku. Masło hodowlane jest również całkowicie bezpieczne do spożycia; proces fermentacji jest zatrzymywany przez pasteryzację i jest starannie pakowany, aby zachować stabilność na półce, tak jak w przypadku masła ze słodkiej śmietany. W regionach, w których to masło nie jest łatwo dostępne, ludzie mogą spróbować skontaktować się z małymi lokalnymi mleczarniami, które czasami produkują małe partie, lub ze sprzedawcami internetowymi, którzy mogą je wysłać.