Τι είναι τα κιτ ELISA;

Το ELISA σημαίνει ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία και είναι μια τεχνική που χρησιμοποιεί αντισώματα και αντιγόνα. Τα κιτ ELISA που χρησιμοποιούνται συνήθως για τον εντοπισμό της παρουσίας μολυσματικών ασθενειών απαιτούν ένα δείγμα, όπως αίμα, να αναμιχθεί με το εμπορικά διαθέσιμο τεστ. Κάθε δοκιμή είναι συγκεκριμένη για έναν συγκεκριμένο οργανισμό και το κιτ δίνει μια θετική ή αρνητική αντίδραση, διαγιγνώσκοντας έτσι μόλυνση από τη συγκεκριμένη ασθένεια.

Το ανθρώπινο ανοσοποιητικό σύστημα χρησιμοποιεί μόρια που ονομάζονται αντισώματα για να αναγνωρίσει ξένους εισβολείς ή μέρη ξένων εισβολέων που ονομάζονται αντιγόνα. Μόλις γίνει αντιληπτή η παρουσία ενός αντιγόνου από το ανοσοποιητικό σύστημα, δημιουργεί περισσότερα μόρια αντισώματος που αναγνωρίζουν ειδικά το αντιγόνο. Αυτά τα αντισώματα συνδέονται με το αντιγόνο και το επισημαίνουν για καταστροφή από το υπόλοιπο ανοσοποιητικό σύστημα.

Εάν ένα άτομο εκτεθεί σε έναν συγκεκριμένο οργανισμό, αναπτύσσει αντισώματα για αυτόν τον οργανισμό. Αυτά τα αντισώματα μπορούν να κυκλοφορούν στην κυκλοφορία του αίματος για μια ζωή ως προστατευτικό μέτρο έναντι μελλοντικής μόλυνσης. Οι άνθρωποι που έχουν υπάρχουσες μολυσματικές ασθένειες θα έχουν επίσης αντισώματα κατά αυτής της ασθένειας στο αίμα τους. Τα αντισώματα και τα αντιγόνα τείνουν να είναι εξαιρετικά ειδικά, αν και μερικές φορές το αντίσωμα μπορεί επίσης να αναγνωρίσει άλλα αντιγόνα που σχετίζονται στενά με το αρχικά επισημασμένο αντιγόνο.

Αυτός ο τρόπος αναγνώρισης αντιγόνου από το ανοσοποιητικό σύστημα μπορεί να αντιγραφεί σε εμπορικά κιτ ELISA. Εάν το κιτ περιέχει είτε ένα αντίσωμα είτε ένα αντιγόνο, τότε ένα δείγμα που περιέχει το μόριο στόχο ή στόχευση θα συνδεθεί με την ουσία του κιτ. Η δέσμευση των αντίθετων μορίων συνήθως υποδηλώνει την παρουσία του συγκεκριμένου οργανισμού που αναζητήθηκε, αλλά αυτή η δέσμευση δεν μπορεί να φανεί εύκολα.

Για να δημιουργηθεί μια κατάσταση όπου μπορεί να μετρηθεί η σύνδεση του αντισώματος στο αντιγόνο, πρέπει να προστεθούν περισσότερες ουσίες στα κιτ ELISA. Συνήθως, αυτός είναι ένας χρωματικός δείκτης, ο οποίος αλλάζει χρώμα μόνο σε συγκεκριμένες περιπτώσεις. Ένας αναλυτής μπορεί να διαβάσει ολοκληρωμένα κιτ ELISA και να προσδιορίσει την παρουσία ή την απουσία ενός αντιγόνου ή αντισώματος από το χρώμα των δειγμάτων.

Οι κατασκευαστές κατασκευάζουν ένα πλαστικό πιάτο με πηγάδια μέσα σε αυτό ως βάση για κάθε κιτ ELISA. Κατά τη διαδικασία παραγωγής, το εσωτερικό κάθε φρεατίου επικαλύπτεται με ένα αντιγόνο ενός συγκεκριμένου οργανισμού, όπως μια πρωτεΐνη από τον ιό της ηπατίτιδας Β. Εκτός από την πλάκα φρεατίου, το κιτ περιέχει δύο ακόμη ουσίες.
Το ένα είναι μια ουσία που αποτελείται από ένα ένζυμο που συνδέεται με ένα αντίσωμα. Αυτό το επιπλέον αντίσωμα κολλάει ειδικά στο αντίσωμα που έχει σχεδιαστεί για να ανιχνεύει το κιτ. Έτσι, κατά τη διάρκεια ενός θετικού κύκλου δοκιμής, το αντιγόνο στα φρεάτια κολλάει στο αναγνωρισμένο αντίσωμα ασθένειας στο δείγμα και η ουσία ενζύμου-αντισώματος κολλάει στο άλλο άκρο του αντισώματος στο δείγμα.

Ως τελευταίο βήμα στην τεχνική, ο αναλυτής ξεπλένει οτιδήποτε δεν είναι συνδεδεμένο στο φρεάτιο, αφήνοντας μόνο τα δεσμευμένα μόρια. Εάν το σύμπλεγμα ενζύμου-αντισώματος δεν βρήκε αντίσωμα για να κολλήσει, τότε ξεπλένεται με τα άλλα χαλαρά μόρια. Στη συνέχεια, αυτός ή αυτή προσθέτει ένα υπόστρωμα στα φρεάτια. Το ένζυμο που συνδέεται με το αντίσωμα δρα στις χημικές ουσίες στα υποστρώματα, διασπώντας τα και παράγοντας διαφορετικό χρώμα υπόστρωμα. Είναι αυτή η αλλαγή χρώματος που ένα μηχάνημα μπορεί να διαβάσει ως θετικό ή αρνητικό τεστ για το παθογόνο.